In-Vitro Studie

ORALE MIKROBIOLOGIE – ERGEBNISSE

1) Projektergebnisse

A) Feststellung der minimalen Hemmkonzentration (MIC) von BlueM
    Mundwasser

    S. mutans Zellen wurden über Nacht in HHG-Bouillon kultiviert. Die Zellen wurden
    verdünnt auf die gleiche Dichte bei 600 nm und wurden sofort benutzt um die MIC
    fest zu stellen. HHG-Bouillon wurde als Medium genutzt und verschiedene
    Konzentrationen (0; 0.01; 0.1; 1; 2; 4; 10% (vol/vol)) des BlueM Mundwassers
    wurden in sterilen 96-well Mikrotiterplatten getestet. Chlorhexidin (0; 0.01; 1; 2; 4; 10
    μg/ml (wt/vol)) diente als Kontrollgruppe. Die Platten wurden über Nacht inkubiert bei
    37°C in Luft mit 5% CO2. Ein Mikroplattenleser diente zur Feststellung der
    Absorbierung bei 600 nm. Die MIC wurde definiert als die niedrigste Konzentration
    des BlueM Mundwassers oder Chlorhexidin, die den sichtbaren Wachstum von S.
    mutans Zellen inhibiert. Alle Experimente wurden mit drei unabhängigen Kulturen von
    S. mutans durchgeführt.
    Unsere Ergebnisse zeigten, dass in den getesteten Zuständen die MIC des BlueM
    Mundwassers 1% war, während die MIC des Chlorhexidins (Kontrollgruppe) bei 10 
    μg/ml für S. mutans Karieserreger lag.

B) Antibiofilmaktivität von BlueM Mundwasser

    Wir bewerteten die in vitro Empfindlichkeit von S. mutans Karieserreger für BlueM
    Mundwasser. Um die kurze Bloßstellung zu einer Mundspülung zu imitieren, wurden
    Biofilme von S. mutans (6-Std, 1-Tag und 3-Tage-alte) 60 Sekunden lang bloßgestellt.
    Um Biofilmzellen abzutöten, wird eine Konzentration von 10 x MIC empfohlen. Für
    die Experimente die Biofilmzellen beinhalteten, wurden danach die jeweiligen
    Konzentrationen von 10% (vol/vol) und 100 μg/ml (wt/vol) BlueM Mundwasser und
    Chlorhexidin getestet. Bloßstellung von Biofilme zu steriler Salzlösung wurde als
    negative Kontrollgruppe genutzt. Die Ergebnisse sind nachfolgend in Abbildung 1 zu
    sehen.

Abbildung 1. Antibiofilmaktivität von BlueM Mundwasser gegen S. mutans Karieserreger.
CHX: Chlorhexidin; BlueM: BlueM Mundwasser. Behandlung (60 Sekunden) mit steriler
Salzlösung wurde durchgeführt um die Prozentzahl der lebensfähigen Biofilmzellen fest zu
stellen. Diese Prozentzahl von Zellüberleben wurde festgestellt durch die Keimzahl der
behandelten Biofilmen mit der Keimzahl der Salzlösungskontrollgruppen zu vergleichen. *, p-
Wert <0,05.

Unsere Ergebnisse zeigten, dass bei einer Konzentration von 10% (vol/vol), BlueM
Mundwasser effektiv die Lebensfähigkeit von S. mutans Biofilmen mit 98% (6-Std-alter
Biofilm), 99.9% (1-Tag-alter Biofilm), 99,9% (3-Tage-alter Biofilm) reduziert. Im Vergleich
konnte die Behandlung mit Chlorhexidin von 60 s bei 10 x MIC die Zelllebensfähigkeit der
Biofilme nicht reduzieren (Tabelle 1).

Abschließend ist die BlueM Mundwasserlösung effektiv um einzellige (planktonische) und
mehrzellige (Biofilm) S. mutans Karieserreger abzutöten, und ist effektiver als Chlorhexidin.
Interessanterweise ist BlueM besonders effektiv um ältere, dickere Biofilme (3-Tage-alt)
abzutöten, die meist weniger empfindlich sind für antimikrobiellen Behandlungen als jüngere
Biofilme.

Datum: 24. Januar, 2018

Dr. Céline M. Lévesque
Associate Professor, Orale Mikrobiologie, Faculty of Dentistry, University of Toronto Canada
Research Chair in Oral Microbial Genetics
Honorary Associate Professor, Faculty of Dentistry, The University of Hong Kong